ਅਣਵਿਕ ਜੀਵ ਖੋਜ ਢੰਗ ਅਤੇ ਆਪਣੇ ਵਰਤਣ

ਅਣਵਿਕ ਜੀਵ ਖੋਜ ਢੰਗ ਆਧੁਨਿਕ ਦਵਾਈ, ਜਵਜਗਆਨਕ ਵਿਗਿਆਨ, ਅਤੇ ਜੀਵ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਅਹਿਮ ਭੂਮਿਕਾ ਅਦਾ ਕਰਦੇ ਹਨ. ਡੀਐਨਏ ਅਤੇ RNA ਦੇ ਅਧਿਐਨ ਕਰਨ ਵਿਚ ਤਰੱਕੀ ਕਰਨ ਲਈ ਧੰਨਵਾਦ ਹੈ, ਵਿਅਕਤੀ ਨੂੰ ਤੇਜਾਬ, ਆਦਿ ਦੇ ਇੱਕ ਮਿਸ਼ਰਣ ਵਿੱਚ ਲੋੜੀਦਾ ਨਿਊਕਲਿਕ ਐਸਿਡ ਦੀ ਪਛਾਣ ਕਰਨ ਲਈ ਕੋਲੀਫਾਰਮ ਦੇ ਜੀਨੋਮ causative ਏਜੰਟ ਦੀ ਪੜਚੋਲ ਕਰਨ ਦਾ ਪਤਾ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ

ਅਣੂ-ਜੀਵ ਢੰਗ. ਇਹ ਕੀ ਹੈ?

ਵਿਗਿਆਨੀ ਦੇ 70-80s ਵਿਚ ਵਾਪਸ ਪਹਿਲੀ ਲੇਖਣ ਨੂੰ ਸੀ ਮਨੁੱਖੀ ਜੀਨਸ. ਇਹ ਘਟਨਾ ਜੈਨੇਟਿਕ ਇੰਜੀਨੀਅਰਿੰਗ ਅਤੇ ਅਣੂ ਜੀਵ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਨੂੰ ਹੁਲਾਰਾ ਦਿੱਤਾ ਹੈ. ਡੀਐਨਏ ਅਤੇ RNA ਦੇ ਹੋਣ ਦੇ ਅਧਿਐਨ ਦਾ ਮਤਲਬ ਹੈ ਕਿ ਇਸ ਨੂੰ ਹੁਣ ਦੀ ਬਿਮਾਰੀ ਦੀ ਤਸ਼ਖੀਸ, ਅਧਿਐਨ ਜੀਨ ਦੇ ਉਦੇਸ਼ ਲਈ ਇਹ ਨਿਊਕਲਿਕ ਐਸਿਡ ਵਰਤਣ ਲਈ ਸੰਭਵ ਹੈ.

ਡੀਐਨਏ ਅਤੇ RNA ਦੀ ਤਿਆਰੀ

ਅਣਵਿਕ ਜੀਵ ਨਿਦਾਨ ਢੰਗ ਅਕਸਰ ਇਹ ਹੈ: ਸਮੱਗਰੀ ਨੂੰ ਸ਼ੁਰੂ ਲੋੜ ਨਿਊਕਲਿਕ ਐਸਿਡ. ਉੱਥੇ ਰਹਿਣ ਜੀਵਾ ਦੇ ਸੈੱਲ ਤੱਕ ਇਹ ਪਦਾਰਥ ਦੀ ਚੋਣ ਕਰਨ ਲਈ ਕਈ ਤਰੀਕੇ ਹਨ. ਹਰ ਇਸ ਦੇ ਫ਼ਾਇਦੇ ਅਤੇ ਨੁਕਸਾਨ ਹੈ, ਅਤੇ ਜਦ ਸ਼ੁੱਧ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਨਿਊਕਲਿਕ ਐਸਿਡ ਨੂੰ ਵੱਖਰਾ ਕਰਨ ਦੀ ਇੱਕ ਢੰਗ ਹੈ ਦੀ ਚੋਣ ਇਸ ਨੂੰ ਮੰਨਿਆ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ.

Marmur ਕੇ ਡੀ 1. ਤਿਆਰੀ. ਢੰਗ ਹੈ, ਸ਼ਰਾਬ ਪਦਾਰਥ ਦੇ ਮਿਸ਼ਰਣ ਦਾ ਇਲਾਜ ਕਰਨ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ, ਸ਼ੁੱਧ ਡੀਐਨਏ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਡਿੱਗਦਾ. ਇਸ ਢੰਗ ਦਾ ਨਨੁਕਸਾਨ ਖੋਰਨ ਪਦਾਰਥ, phenol ਅਤੇ chloroform ਵਰਤਣ ਦੀ ਹੈ.

2. ਬੂਮ 'ਤੇ ਡੀ ਦਾ ਅਲਗ. ਮੁੱਖ ਪਦਾਰਥ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਇੱਥੇ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਹੈ - guanidine thiocyanate (GuSCN) ਹੈ. ਇਹ ਦੇ ਬਿਆਨ ਨੂੰ ਉਤਸ਼ਾਹਿਤ ਡੀਆਕਸੀਰਾਈਬੋਨੁਕਲੇਇਕ ਐਸਿਡ ਖ਼ਾਸ substrates ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਇਸ ਨੂੰ ਬਾਅਦ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਬਫਰ ਦੇ ਜ਼ਰੀਏ ਇਕੱਠਾ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ 'ਤੇ. ਪਰ GuSCN - TCP ਦੇ ਰੋਕਣਾ ਵਾਲਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਇਹ ਵੀ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਦੇ ਇੱਕ ਛੋਟੇ ਹਿੱਸੇ ਨੂੰ ਖੂਨ 'ਚ ਜਮ੍ਹਾ ਕੀਤਾ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਪੋਲੀਮੇਰੇਸ ਚੇਨ ਰਿਏਕਸ਼ਨ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਜ਼ਰੂਰੀ ਹੈ, ਜਦ ਕਿ ਨਿਊਕਲਿਕ ਐਸਿਡ ਨਾਲ ਕੰਮ ਕਰ ਰਿਹਾ ਹੈ ਦੇ ਕੋਰਸ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ.

3. ਛਵੀ ਦਾ ਵਰਖਾ. ਢੰਗ ਨੂੰ ਪਿਛਲੇ ਲੋਕ, ਜੋ ਕਿ ਅਣੂ ਵਿਚ ਆਪਣੇ ਆਪ ਨੂੰ dehoksiribonukleinovoy ਐਸਿਡ ਅਤੇ ਛਵੀ ਜਮ੍ਹਾ ਨਾ ਰਹੇ ਹਨ ਫ਼ਰਕ ਹੈ. ਇਹ ਕਰਨ ਲਈ, ਲਿਥਿਅਨ exchangers ਦਾ ਇਸਤੇਮਾਲ ਕਰੋ. ਨੁਕਸਾਨ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਨਾ ਸਾਰੇ ਪਦਾਰਥ ਦਾ ਬੰਦੋਬਸਤ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ.

4. ਮਾਸ ਸਕ੍ਰੀਨਿੰਗ. ਇਹ ਵਿਧੀ ਮਾਮਲੇ ਵਿੱਚ ਵਰਤਿਆ ਹੈ ਜਦ ਤੁਹਾਨੂੰ ਡੀਐਨਏ ਅਣੂ ਦੀ ਬਣਤਰ, ਅਤੇ ਕੁਝ ਦੇ ਅੰਕੜੇ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਦੀ ਲੋੜ ਬਾਰੇ ਸਹੀ ਜਾਣਕਾਰੀ ਹੈ ਕਰਨ ਦੀ ਲੋੜ ਨਹ ਹੈ ਹੈ. ਕਾਰਨ ਇਹ ਹੈ ਕਿ ਨਿਊਕਲਿਕ ਐਸਿਡ ਬਣਤਰ ਜਦ ਕਾਟ, ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ ਐਲਕਲੀ ਪਰਬੰਧਨ ਨੁਕਸਾਨ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ.

ਖੋਜ ਢੰਗ ਦੇ ਵਰਗੀਕਰਨ

ਖੋਜ ਦੇ ਸਾਰੇ ਅਣੂ-ਜੀਵ ਢੰਗ ਤਿੰਨ ਮੁੱਖ ਗਰੁੱਪ ਵਿੱਚ ਵੰਡਿਆ ਗਿਆ ਹੈ:

1. Amplification (ਪਾਚਕ ਦਾ ਇੱਕ plurality ਵਰਤ ਕੇ). ਪੋਲੀਮੇਰੇਸ ਚੇਨ ਰਿਏਕਸ਼ਨ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਪਤਾ ਢੰਗ ਦੇ ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਅਹਿਮ ਭੂਮਿਕਾ ਅਦਾ ਕਰਦਾ ਹੈ - ਇਹ ਪੀਸੀਆਰ ਵੀ ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ.

2. Neamplifikatsionnye. ਢੰਗ ਦੇ ਇਸ ਗਰੁੱਪ ਨੂੰ ਸਿੱਧੇ ਨਿਊਕਲਿਕ ਐਸਿਡ ਮਿਸ਼ਰਣ ਦੇ ਕੰਮ ਨਾਲ ਸੰਬੰਧਿਤ ਹੈ. ਉਦਾਹਰਨ ਸੀਟੁ hybridization, ਆਦਿ ਵਿੱਚ, 3 ਕਿਸਮ ਢੱਕ ਹਨ

3. ਢੰਗ ਪੜਤਾਲ ਅਣੂ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਇੱਕ ਖਾਸ ਡੀ ਜ RNA ਪੜਤਾਲ ਕਰਨ ਲਈ binds ਤੱਕ ਸਿਗਨਲ ਦੀ ਮਾਨਤਾ 'ਤੇ ਆਧਾਰਿਤ. ਉਦਾਹਰਨ - hybridization ਸਿਸਟਮ Hybride ਕੈਪਚਰ ਸਿਸਟਮ ਦਾ ਹੱਲ (HC2).

ਜੋ ਕਿ ਪਾਚਕ ਅਣੂ ਜੀਵ ਖੋਜ ਢੰਗ ਵਿੱਚ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ

ਕਈ ਅਣੂ ਡਾਇਗਨੌਸਟਿਕ ਤਕਨੀਕ ਪਾਚਕ ਦੇ ਵਿਆਪਕ ਸੀਮਾ ਹੈ, ਦੀ ਵਰਤੋ ਸ਼ਾਮਲ. ਹੇਠ ਸਭ ਅਕਸਰ ਵਰਤੇ ਗਏ ਹਨ:

1. ਪਾਬੰਦੀ ਪਾਚਕ - "ਕੱਟ" ਜ਼ਰੂਰੀ ਹਿੱਸੇ ਨੂੰ ਡੀਐਨਏ ਅਣੂ.

2. ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਸ - ਇੱਕ ਡਬਲ-ਫਸੇ ਡੀਆਕਸੀਰਾਈਬੋਨੁਕਲੇਇਕ ਐਸਿਡ ਅਣੂ synthesizes.

3. ਉਲਟਾ transcriptase (transcriptase ਉਲਟਾ) - ਇੱਕ RNA ਟੈਪਲੇਟ ਤੱਕ ਡੀਐਨਏ synthesize ਕਰਨ ਲਈ ਵਰਤਿਆ.

4. ਡੀਐਨਏ ligase - ਨੁਕਲਿਆਈ ਵਿਚਕਾਰ phosphodiester ਕੈਦ ਦਾ ਗਠਨ ਕਰਨ ਲਈ ਜ਼ਿੰਮੇਵਾਰ ਹੈ.

5. exonuclease - ਡੀਆਕਸੀਰਾਈਬੋਨੁਕਲੇਇਕ ਐਸਿਡ ਅਣੂ ਦੇ ਅੰਤ ਹਿੱਸੇ ਤੱਕ ਨੁਕਲਿਆਈ ਨੂੰ ਦੂਰ.

ਪੀਸੀਆਰ - ਡੀਐਨਏ amplification ਦੀ ਮੁੱਢਲੀ ਢੰਗ ਨੂੰ

ਪੋਲੀਮੇਰੇਸ ਚੇਨ ਰਿਏਕਸ਼ਨ (ਪੀਸੀਆਰ) ਵਿਆਪਕ ਆਧੁਨਿਕ ਅਣੂ ਜੀਵ ਵਿੱਚ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਹੈ. ਇਹ ਵਿਧੀ, ਜਿਸ ਵਿਚ ਇਕ ਵੀ ਡੀ ਅਣੂ ਨਕਲ (amplifying ਅਣੂ) ਦੀ ਇੱਕ ਵੱਡੀ ਗਿਣਤੀ ਨੂੰ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ.

ਪੀਸੀਆਰ ਦੇ ਮੁੱਖ ਫੰਕਸ਼ਨ:

- ਰੋਗ ਦਾ ਹੱਲ;

- ਜੀਨ ਡੀ ਹਿੱਸੇ ਦੀ ਕਲੋਨਿੰਗ ਕਰਨ.

ਬਾਹਰ ਲੈ ਲਈ ਪੋਲੀਮੇਰੇਸ ਚੇਨ ਰਿਏਕਸ਼ਨ ਹੇਠ ਤੱਤ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ: ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਡੀਐਨਏ ਅਣੂ, ਇੱਕ thermostable ਡੀ ਪੋਲੀਮੇਰੇਸ (Taq ਜ Pfu), deoxyribonucleotide ਫਾਸਫੇਟ (ਨਾਈਟ੍ਰੋਜਨ ਠਿਕਾਣਾ ਦੇ ਸਰੋਤ), primers (2 ਪਰਾਈਮਰ 1 ਡੀਐਨਏ ਅਣੂ) ਅਤੇ ਆਪਣੇ ਆਪ ਨੂੰ ਇੱਕ ਬਫਰ ਸਿਸਟਮ ਹੈ, ਜੋ ਬਤੀਤ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ ਸਾਰੇ ਪ੍ਰਤੀਕਰਮ.

ਨਸ਼ਟ ਹੋਣ, ਪਰਾਈਮਰ annealing ਅਤੇ elongation: ਪੀਸੀਆਰ ਤਿੰਨ ਕਦਮ ਦੇ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ.

1. ਨਸ਼ਟ. 94-95 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ proshodit ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਡੀ ਦੇ ਦੋ ਕੈਦ ਵਿਚਕਾਰ ਹਾਈਡਰੋਜਨ ਬੰਧਨ ਤੋੜ ਹੈ, ਅਤੇ ਇਸ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਦੇ ਤੌਰ' ਤੇ ਸਾਨੂੰ ਦੋ ਸਿੰਗਲ-ਫਸੇ ਅਣੂ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰੋ.

2. annealed primers. 50-60 ਡਿਗਰੀ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ centigrade complementarity ਦੀ ਕਿਸਮ ਅਨੁਸਾਰ ਸਿੰਗਲ-ਫਸੇ ਨਿਊਕਲਿਕ ਐਸਿਡ ਅਣੂ ਦੇ ਅੰਤ' ਤੇ ਤਾਜਪੋਸ਼ੀ primers ਵਾਪਰਦਾ ਹੈ.

3. elongation. 72 ਡਿਗਰੀ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਕੱਢਕੇ ਧੀ ਨੂੰ ਡਬਲ ਡੀਆਕਸੀਰਾਈਬੋਨੁਕਲੇਇਕ ਐਸਿਡ ਅਣੂ ਫਸੇ ਰਿਹਾ ਹੈ.

ਡੀਐਨਏ ਕ੍ਰਮ

ਅਣਵਿਕ ਜੀਵ ਖੋਜ ਢੰਗ ਨੂੰ ਅਕਸਰ ਡੀਆਕਸੀਰਾਈਬੋਨੁਕਲੇਇਕ ਐਸਿਡ ਦੀ ਇੱਕ ਅਣੂ ਵਿੱਚ ਨੁਕਲਿਆਈ ਦੀ ਲੜੀ ਦੇ ਗਿਆਨ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ. ਇਹ ਪਤਾ ਕਰਨ ਲਈ ਜੈਨੇਟਿਕ ਕੋਡ ਲੜੀ. ਭਵਿੱਖ ਦੇ ਅਣੂ ਨਿਦਾਨ ਗਿਆਨ ਮਨੁੱਖੀ ਲੜੀ ਦੀ ਸੂਰਤ ਵਿਚ ਲਏ ਤੇ ਅਧਾਰਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾਵੇਗਾ.

ਕ੍ਰਮ ਦੇ ਹੇਠ ਕਿਸਮ:

• Maxam-ਗਿਲਬਰਟ ਦੇ ਕੇ ਕ੍ਰਮ;
• Sanger ਕ੍ਰਮ;
• pyrosequencing;
• nanoporovoe ਕ੍ਰਮ.